D-半乳糖诱导大鼠骨髓基质细胞衰老及其机制

摘要：

目的 构建大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外和体内衰老模型,观察BMSCs衰老生物学特性.方法 体外对照组:常规培养大鼠骨髓BMSCs,取第三代(P3)细胞继续培养48 h;体外衰老组:在对照组基础上加入D-半乳糖(D-Gal,终浓度30 g/L),作用48 h;体内衰老组:大鼠皮下注射D-Gal(120 mg/kg·d),qd×42 d;体内对照组:注射等时等量0.9%氯化钠溶液,模型完成第2天,分离培养BMSCs,取P3细胞进行实验.检测:CCK-8测定细胞增殖;流式细胞术分析周期和凋亡率;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察BMSCs衰老百分率;DCFH-DA荧光流式细胞术检测活性氧簇(ROS)水平,酶学法检测过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot检测P16、P21、P53、CDK2和cyclin D表达.结果 D-Gal体外与体内致衰老组BMSCs增殖能力下降;细胞G0/G1期比例增高、S期比例降低(P<0.05);SA-β-Gal染色阳性百分率上升(P<0.05);胞内ROS、MDA上升,SOD下降(P<0.05);P16、P21、P53表达上调,CDK2、cyclin D下调(P<0.05).结论 D-Gal在体内与体外均能构建BMSCs衰老模型,其机制与D-Gal诱导BMSCs氧化损伤和激活衰老信号途径相关.

关键词：骨髓基质细胞、D-半乳糖、衰老生物学、大鼠、机制

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分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金81173398,81673748;重庆市科委基础与前沿研究资助项目cstc2014jcyjA10001

在线出版日期：2017-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：307-312