TRIM22稳定过表达细胞系的构建及其抗流感病毒的功能
目的 构建稳定表达TRIM22的HEK293T细胞系HEK293T-TRIM22,观察TRIM22蛋白在该细胞内的表达及对流感病毒复制的影响并初步探究其抑制机制.方法 扩增TRIM22基因并与反转录病毒载体进行体外重组连接,经菌液PCR、测序确认后与反转录病毒骨架载体共转染进HEK293T细胞进行包装病毒.用包装的反转录病毒感染HEK293T细胞,感染24 h后用嘌呤霉素筛选稳定过表达TRIM22的细胞,筛选48 h后用Western blot检测TRIM22表达水平;用IAV-LUC病毒检测稳定过表达TRIM22的HEK293T对流感病毒的抑制作用;再用双分子荧光互补实验(BiLC)检测与TRIM22相互作用的流感蛋白.结果 经测序确认目的基因TRIM22成功克隆到载体pQC-XIP中.包装反转录病毒并感染HEK293T细胞,经过嘌呤霉素筛选后,稳定过表达TRIM22的HEK293T细胞中TRIM22的蛋白表达水平升高(P＜0.05).在稳定过表达TRIM22的细胞内流感病毒复制减弱(P＜0.05).BiLC检测TRIM22与流感蛋白NP有相互作用.结论 稳定过表达TRIM22的HEK293T细胞系构建成功,TRIM22与NP有相互作用并且抑制流感病毒复制.
TRIM22、反转录病毒、HEK293T细胞、流感病毒
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R392-33
2016-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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