miR-1247-5p对Smad2基因的靶向调控作用
目的 利用miR-1247-5p过表达模拟物mimics,研究miR-1247-5p对TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的靶向调控作用.方法 合成模拟miR-1247-5p过表达的模拟物mimics,及抑制miR-1247-5p表达的抑制物inhibitors;同时构建与miR-1247-5p互补靶基因Smad2的3'非翻译区,将其克隆到线性化的Report荧光报告载体中.将测序鉴定阳性的report-Smad2 3'-UTR重组质粒,与miR-1247-5p的mimics/inhibitors共转染至HEK-293T细胞,通过relative luciferase activity实验验证靶向关系,并通过Western blot实验进一步检测Smad2蛋白表达水平.结果 成功构建report-Smad2 3'-UTR重组质粒,Western blot实验表明转染miR-1247-5p mimics组中Smad2蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-1247-5p inhibitors组中,Smad2蛋白表达上调(P<0.05).结论 证实miR-1247-5p直接靶向TGF-β信号通路中关键蛋白Smad2的表达,在蛋白水平对其进行调控,为进一步研究miRNA在细胞通路中的调控作用提供了依据.
miR-1247-5p、TGF-β信号通路、Smad2基因、肿瘤
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R392
国家自然科学基金81460368;宁夏科技支撑项目宁科计字201320号;宁夏自然科学基金NZ-13149
2016-05-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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