6种人DNA甲基转移酶3B典型异构体的克隆、表达及对293A细胞增殖的影响
目的 构建6种人DNA甲基转移酶(DNMT)3B典型的异构体的真核表达载体并对其进行过表达,初步探讨其在人胚肾细胞系293A中的生物学作用.方法 以人HCT116 cDNA为模板,采用高保真PCR获得DNMT3B1和DNMT3 B2的全长,并以DNMT3B2为模板,利用特异的引物扩增出DNMT3B3、DNMT3B4、DNMT3B5和DNMT3B7,将PCR产物连接到真核表达载体pCMV-2B上,并对上述载体进行BamH Ⅰ、EcoRⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,将重组质粒转染293A细胞并利用G418筛选出稳定表达的克隆株,MTT法检测细胞增殖活力.结果 双酶切和测序结果表明克隆了6种人DNMT3B异构体CDS序列,经蛋白印迹检测,DNMT3B异构体在293A细胞中获得稳定表达;稳定过表达DNMT3B3、DNMT3B4和DNMT3B7可以抑制细胞增殖.结论 构建了人DNMT3B异构体真核表达载体及获得了其稳定表达细胞株,DNMT3B异构体蛋白对胚肾细胞系293A的增殖有不同的作用.
DNA甲基转移酶3B、异构体、胚肾细胞293A、增殖
35
R34(人体生物化学、分子生物学)
国家自然科学基金81060212,81160244,81360316,81460283;内蒙古自然科学基金2010BS1104,2014MS0810;中国博士后基金20080430851;内蒙古自治区高等学校科研项目NJZY12221,NJZY12225;内蒙古自治区高等学校青年科技英才支持计划NJYT-13-A10;研究生科研创新项目S201410127Y02;教育部留学回国人员科研启动基金46批
2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1460-1465
