腺病毒介导的AIF及其突变体对K562细胞凋亡的影响

摘要：

目的 构建凋亡诱导因子(Ad-AIF)及其突变体的重组腺病毒(Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF),观察其对白血病K562细胞凋亡的影响.方法 扩增AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF片段,分别克隆至pAd-Track-CMV-HA质粒中,经过PCR、双酶切和测序鉴定后,分别与pAd-Easy1质粒重组得到腺病毒质粒,经包装和扩增后得到腺病毒,以无外源序列的腺病毒作为空载腺病毒.Western blot验证重组腺病毒在K562细胞中的表达,免疫共沉淀检测AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF是否与HSP70相结合,Hoechst33258染色和流式细胞术检测AIF、DMLS-AIF和DHBD-AIF对K562细胞凋亡的影响.结果 重组腺病毒构建成功,能够在K562细胞中表达;AIF和DMLS-AIF与HSP70相结合,DHBD-AIF不结合HSP70;Ad-DHBD-AIF引起K562细胞染色质凝集,而Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF处理的K562细胞染色质分布均匀;Ad-DHBD-AIF引起K562细胞凋亡数明显高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF(P＜0.05).结论 成功构建了腺病毒Ad-AIF、Ad-DMLS-AIF和Ad-DHBD-AIF,其中Ad-DHBD-AIF对K562细胞的凋亡影响明显高于Ad-AIF和Ad-DMLS-AIF,为K562细胞凋亡受阻的进一步研究奠定了基础.

关键词：凋亡诱导因子、细胞凋亡、腺病毒载体、K562细胞

所属期刊栏目：35

分类号：R733.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81070421

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1453-1459