小鼠脊髓微血管周细胞的体外培养及鉴定
目的 应用周细胞培养基(PCM)分离筛选小鼠脊髓微血管周细胞(SCMP),对其生物学功能进行评价.方法 10只3周龄C57小鼠,无菌条件下取脊髓去除软脊膜,剪碎成大约1 mm×1 mm×1 mm.两次酶消化后用含20％牛血清白蛋白的DMEM离心获得微血管.用内皮细胞培养基(ECM)培养,传代2次后改用PCM培养.倒置显微镜观察细胞增殖状况.免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)、神经元-胶质抗原2(NG2)、von Willebrand因子(vWF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.流式检测CD140b、CD31、CD11b和GFAP的表达.将PCM换为10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,检测细胞α-SMA表达的变化.通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力.结果 接种48 h细胞爬出,7～9d汇合,周细胞和内皮细胞伴随状增殖.改用PCM培养后内皮细胞减少,周细胞呈优势生长.免疫细胞化学表明PDGFRβ和NG2阳性,vWF和GFAP阴性;流式结果表明细胞PDGFRβ的阳性率为95.52％±2.55％,GFAP为0.63％±0.26％,CD31为0.80％±0.26％,CD11b为1.02％±0.35％.10％胎牛血清的DMEM促进细胞分化,α-SMA表达升高.成管实验周细胞与内皮细胞共同形成管腔样结构.结论 通过PCM筛选法能够成功获得纯度较高的SCMP,所获得的细胞具备明显的周细胞的形态和功能特征.
周细胞、脊髓、微血管、细胞分离
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R744.9;R-332(神经病学与精神病学)
2014年协和青年教师基金&中央高校基本科研业务费专项资金33320140062
2015-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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688-694
