KLF9基因腺病毒载体的构建及其抗ROS功能

摘要：

目的 构建及鉴定KLF9基冈过表达的腺病毒载体,初步研究KLF9在对抗反应活性氧方面的功能.方法 克隆KLF9过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,Pme Ⅰ酶切线性化,转化E.coli.BJ5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌,产生重组腺病毒载体.重组载体经过卡那霉素抗性筛选和限制性内切酶分析确认重组后,再用Pac Ⅰ线性化重组质粒,回收,转染293A细胞,7～12d包装产生病毒颗粒.利用H2O2和过表达KLF9的腺病毒处理体外培养的C57 BL/6J小鼠原代肝脏细胞,实时定量PCR检测KLF9和抗ROS基因(CAT、SOD2和GPx1)的表达.结果 H2O2可以刺激C57BL/6J小鼠原代肝脏细胞KLF9和抗ROS基因的表达上调(P＜0.05).定量PCR以及Western blot结果显示成功包装过表达KLF9腺病毒,感染效率达90％以上.过表达KLF9可以上调抗ROS基因的表达水平(P＜0.05).结论 初步认定KLF9基因可参与C57 BL/6J小鼠原代肝脏细胞中抗ROS基因的调节.

关键词：KLF9、腺病毒、反应活性氧

所属期刊栏目：34

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81170763

在线出版日期：2014-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：762-766