miR-196b慢病毒表达载体的构建和功能鉴定
目的 构建携带miR-196b的慢病毒表达载体,为研究miR-196b在慢性粒细胞白血病中的功能及其对慢粒发生发展的作用奠定基础.方法 以人骨髓细胞基因组DNA为模板,PCR法扩增miR-196b的前体序列,慢病毒表达载体plVTHM构建重组载体plVTHM-miR-196b,并包装病毒和进行滴度测定.用病毒液感染K562细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,用流式细胞仪分选感染后绿色荧光蛋白阳性的K562细胞,再用实时荧光定量PCR测定细胞内miR-196b的表达水平.最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 成功构建了plVTHM-miR-196b慢病毒表达载体;载体中绿色荧光蛋白有较好的表达活性;与对照组细胞相比,试验组miR-196b表达水平有显著提升(P＜0.05); K562细胞稳定过表达miR-196b后增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-196b过表达载体,并在K562细胞内稳定高表达,miR-196b有抑制K562细胞增殖的作用.
miR-196b、慢病毒表达载体、载体构建
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Q784(基因工程（遗传工程）)
广东省医学科研基金B2013220;南方医科大学“科研启动计划”青年科技人员培育项目2012;广东省科技计划项目2012B031800135;广东省自然基金项目S2011020003140
2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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