miR-30a表达载体构建、病毒包装和表达活性的检测

摘要：

目的 构建携带miR-30a的慢病毒表达载体,为研究miR-30a在慢性粒细胞白血病中的作用机制及对伊马替尼耐药性的影响奠定基础.方法 提取人骨髓细胞基因组DNA,扩增miR-30a的前体序列,克隆到plVTHM慢病毒表达载体上,测序鉴定.重组载体进行病毒包装,感染K562细胞,测定病毒滴度.感染的K562细胞用流式细胞仪分选带有绿色荧光的GFP阳性的细胞,对分选的细胞用实时荧光定量PCR法检测miR-30a在细胞内的表达水平.最后用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况.结果 重组慢病毒表达载体测序完全正确;病毒滴度检测为6×106 TU/mL;选用160 μL病毒液/1 mL培养基感染K562细胞;感染的K562细胞中miR-30a的表达水平显著增强(P＜0.05);过表达miR-30a后K562细胞增殖水平显著下降(P＜0.05).结论 成功构建了miR-30a慢病毒表达载体,并可在K562细胞中稳定表达,且miR-30a有抑制K562细胞增殖的作用.

关键词：miR-30a、慢病毒表达载体、载体构建

所属期刊栏目：34

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省医学科研基金B2013220;南方医科大学2012年度“科研启动计划”青年科技人员培育项目;广东省科技计划项目2012B031800135;广东省自然科学基金S2011020003140

在线出版日期：2014-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：494-498