Neuralized siRNA表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建Neuralized siRNA干扰载体并观察其对细胞中Neuralized表达水平的影响.方法 化学合成靶向Neuralized的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接.酶切后测序鉴定正确,转染入HEK293细胞.利用Western blot和间接免疫荧光技术分析Neuralized siRNA载体对细胞中Neuralized表达及其定位的影响.结果 Neuralized siRNA干扰载体经酶切及测序分析表明,目的核苷酸序列成功插入预计位点且序列正确；Neuralized siRNA干扰载体转染HEK293细胞后,Western blot检测显示,Neuralized siRNA干扰载体明显降低细胞中Neuralized蛋白表达；间接免疫荧光显示,转染4种Neuralized siRNA均能使定位于细胞膜上的Nneuralized蛋白的荧光强度变暗.结论 Neuralized siRNA干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中Neuralized的表达.

关键词：Neuralized、SiRNA干扰

所属期刊栏目：33

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金31060136

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：898-903