硫酸化胆汁酸水解酶基因BSS H1克隆、表达及活性

摘要：

目的 从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶(BSS)基因,并表达蛋白产物、研究其活性.方法 通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1；通过PCR扩增获得BSS H1基冈全序列,将其插入pET30b(+)载体,并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.通过优化诱导表达条件,实现重组蛋白BSS H1的高效表达；通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质.结果 工程菌扩大培养3h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5h时蛋白表达量最高；研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸,在pH 8.5时,其活性分别是(632±65) U/L和(52±4) U/L.结论 成功构建BSS H1高效表达菌株.BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道,其机制尚不明确,值得深入研究.

关键词：铜绿假单胞菌、硫酸化胆汁酸水解酶、胆汁酸检测、原核表达、立体异构反应

所属期刊栏目：33

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：876-880