截短ALT1蛋白的获得及其多克隆抗体的制备

摘要：

目的 原核表达、纯化截短ALT1蛋白,制备ALT1多克隆抗体.方法 利用pCold TF载体原核表达系统,IPTG诱导,表达经生物信息学分析含有两个编码ALT1抗原表位的ALT1 N端1～115个氨基酸序列的基因片段,依次经镍(Ni)离子亲和柱纯化、HRV 3C蛋白酶酶切、二次镍离子亲和柱纯化和分子筛柱层析得到不带标签的截短ALT1纯蛋白,用纯蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.结果 经测序证实,成功构建了截短pCold TFT-ALT1表达载体.获得纯度达90％的不带标签的截短ALT1重组蛋白,制备了效价达4.0×106的ALT1多克隆抗体,经Western blot鉴定,能特异性地识别ALT1抗原和肝细胞裂解液.结论 成功获得高质量的截短ALT1无标签蛋白及其特异的多克隆抗体,为ALT1的免疫学检测试剂的研发提供了依据.

关键词：ALT1、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：33

分类号：R575.1-3(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金31270984

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：281-285