293-siDrosha稳定细胞系模型的建立及microRNA相关功能的检测

摘要：

目的 利用RNAi实验方法构建293-siDrosha稳定细胞系,并探讨该稳定细胞系在microRNAs功能研究中的应用.方法 将质粒pSicoR-human Drosha1转人人胚肾293细胞,用G418筛选2～3周后,获得293-siDrosha#3稳定细胞系,并用RT-PCR、Western blot、real-time PCR等方法检测293-siDrosha#3稳定细胞系中Drosha基因mRNA和蛋白质表达情况.并用poly(A)实时定量RT-PCR法检测野生293细胞,Mix细胞(未克隆的293-siDrosha细胞),293-siDrosha#3细胞(克隆的293-siDrosha细胞)中内源hsa-miR-491-5p的表达情况.结果 构建了293-siDrosha#3 稳定细胞系,与对照组相比,293-siDrosha#3细胞中Drosha基因的mRNA和蛋白质表达水平均显著下降.检测内源性hsa-miR-491-5p在对照组和293-siDrosha#3细胞中表达,结果表明对照组细胞中表达的hsa-miR-491-5p是293-siDrosha#3细胞的近120倍.结论 成功构建了293-siDrosha稳定细胞系,并且证明此稳定细胞系可以作为研究一些microRNAs相关功能的模式细胞系.

关键词：siDrosha、microRNAs、293细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R113(卫生基础科学)

资助基金：国家自然科学基金81171944;2010年中国医学科学院基础医学研究所所院长基金2010PYZ17

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：381-385