引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建单链抗体库

摘要：

目的 引入易错PCR和DNA-shuffling技术构建高库容量的单链抗体库.方法 收集不同年龄、性别、健康状态的人的静脉血各5 mL,提取单个核细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增VH和VL基因,应用易错PCR对VH和VL基因进行突变,同时用DNA-shuffling技术对全长单链抗体基因进行体外改组,获得的分子与T载体连接,转化E.coli DH5α,选取阳性克隆,经菌落PCR后酶切鉴定抗体库多样性,计算分析单链抗体库容量.结果 成功构建了库容量为4.37×1013的单链抗体库,经酶切鉴定,初步判定抗体库多样性良好.结论 引入易错PCR和DNA-shuffling技术,成功构建了单链抗体库,为后续筛选高亲和力抗体奠定了实验基础.

关键词：易错PCR、DNA-shuffling、单链抗体库

所属期刊栏目：32

分类号：R392.11

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：56-60