穿膜肽-EGFP融合蛋白的表达、纯化与鉴定

摘要：

目的 构建EGFP-CPPs融合基因载体,表达、纯化并鉴定EGFP-CPPs融合蛋白.方法 通过碱基合成的方法合成含有CPPs基因序列的EGFP上游引物,PCR扩增后收集CPPs-EGFP融合基因片段并电泳鉴定,将融合基因表达载体转染大肠杆菌并扩增表达,收集表达蛋白后过层析柱纯化,蛋白电泳检测表达蛋白分子质量,蛋白飞行质谱分析检测蛋白序列,体外细胞实验验证其穿膜功能.结果 电泳检测可见与CPPs-EGFP分子质量对应的电泳条带,构建质粒测序含有目的 基因序列.蛋白电泳检测到纯度较高的融合蛋白,其蛋白序列与目的 序列一致.体外细胞实验证实了融合蛋白的穿膜功能.结论 成功制备了具有穿膜功能的CPPsz-EGFP融合蛋白,为其促进抗体-蛋白微球偶联物进入肿瘤细胞发挥治疗作用的研究奠定了基础.

关键词：穿膜肽、增强型绿色荧光蛋白、膀胱肿瘤

所属期刊栏目：30

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金30700836;中国博士后科学基金20070420152

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：902-906