抗人BPI23单克隆抗体的制备和鉴定

摘要：

目的 采用杂交瘤技术制备抗人BPI23单克隆抗体,并对其应用进行初步分析.方法 免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞按常规方法融合;用问接ELISA法和Western-blot筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法亚克隆3次获得稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注入小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单抗并对抗体类型进行鉴定;用Western-blot分析抗体的特异性;用间接ELISA法测抗体效价;将分离纯化的正常人外周血中性粒细胞和单个核细胞制成涂片,用抗人BPI23单克隆抗体进行免疫染色.结果 获得3个(1B4、9C12:和2H11)稳定分泌抗人BPI23单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型分别为κ型IgM、κ型IgG1和κ型IgG1;抗体效价分别为1.28×105、1.28×105和4.1×106,纯化后抗体含量分别为0.208 g/L、2.03 g/L和3.88 g/L;3种纯化抗体均能与本实验制备的人BPI23和市售人BPI55标准品特异性结合,而不能与小鼠BPI25和人LBP结合;在免疫组化实验中,1B4、9C12:和2H11单抗均能与人中性粒细胞中的BPI特异性结合.结论 成功制备了人BPI23特异性单克隆抗体,为BPI检测试剂盒的研制奠定了基础.

关键词：人BPI23、杂交瘤细胞、单克隆抗体

所属期刊栏目：29

分类号：R392

资助基金：北京市自然科学基金7082016

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1097-1101