显性负突变存活素质粒的构建

摘要：

目的 构建显性负突变存活素质粒.方法 从大鼠心脏微血管内皮细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,利用巢式PCR扩增存活索基因全序列,并引入酶切位点,利用重叠PCR对存活素基因进行定点突变,然后与带绿色荧光的真核表达载体pEGFP-N3进行重组,经测序鉴定后转染细胞,观察对细胞凋亡的影响.结果 用巢式PCR扩增出含存活素基因的496 bp产物,和引入酶切位点后452 bp产物.通过重叠PCR 3次PCR反应,得到452 bp大小的定点突变产物.重组载体经测序鉴定表明插入片段无误,转染细胞后能发出明亮的绿色荧光,Hochest染色显示细胞凋亡比空质粒对照组显著.结论 成功构建了显性负突变存活素质粒.

关键词：显性负突变、存活素、重叠PCR

所属期刊栏目：29

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：上海高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金slg-07046

在线出版日期：2013-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：188-192