人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系

摘要：

目的 研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系.方法 用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coli B121(DE3)中进行表达.hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化.hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性.结果 测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在.GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在.3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性.与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,a螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%.结论 hHSFC末端结构,特别是a螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用.

关键词：人造血增效因子、C末端缺失变异体、趋化活性

所属期刊栏目：28

分类号：R977.8(药品)

在线出版日期：2008-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：144-148