10.3969/j.issn.1001-6325.2007.03.021
大鼠脑组织NT-3融合蛋白的表达、纯化及抗体制备
目的 克隆大鼠脑组织神经营养素3(NT-3)基因,原核诱导表达并纯化,制备高效价抗体,为研究其对周围神经损伤修复的影响提供实验基础. 方法 用RT-PCR法扩增目的 基因,依次克隆入pMD-18T载体及亚克隆入pRSET-A原核表达载体.导入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定后用镍柱纯化.免疫家兔制备特异性抗体. 结果 RT-PCR得到777 bp的片断,酶切鉴定及测序证实与GeneBank中大鼠NT-3序列一致,成功构建了原核表达载体pRSET-A-NT-3.导入BL21诱导得到一条约34 ku的新蛋白带.免疫家兔获得1∶64000的高效价特异性抗大鼠NT-3血清.
大鼠、NT-3基因、基因表达、蛋白纯化
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R3(基础医学)
国家自然科学基金30271315
2007-04-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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