利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达

摘要：

目的 建立一组灵敏的检测时钟基因(clock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况.方法 培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系.利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况.结果 确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数.证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子.利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整.结论 巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整.时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用.

关键词：胚胎小体、巢式聚合酶链反应、时钟基因、单细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30400148;国家重点基础研究发展计划973计划001CB510104;北京市自然科学基金7031002;北京市科技新星计划项目H020821400190;北京市科委科技计划项目H020220010290

在线出版日期：2007-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1313-1318