pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定

摘要：

目的 构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证.方法 按照人促红细胞生成素(EPO)基因3'末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3'末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有Mlu I和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体.构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-HIF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoCl2)作用24h后测定报告基因的活性.结果 质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoCl2及pcDNA3-HIF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P＜0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P＜0.01).结论 pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(HIF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中HIF-1的表达及蛋白活性.

关键词：低氧诱导因子-1α、低氧反应元件、质粒构建、基因表达

所属期刊栏目：26

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2006-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1220-1223