VEGF siRNA的筛选、评价及siRNA的设计规则探讨

摘要：

目的设计并评价9条VEGF siRNA的干扰效果,并提出新的高效siRNA设计规则.方法用siRNA现有设计规则与计算机辅助结合共设计9条VEGF siRNA序列,长度为19 bp.体外转录法构建9条VEGF siRNA,通过脂质体介导转染神经胶质瘤U251细胞株,培养48 h,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的表达量,分析9条VEGFsiRNA序列特征与其干扰效果的关系.结果用"H-b"指数可以量化VEGF mRNA二级结构;VEGF蛋白表达的抑制程度与"H-b"指数呈负相关(r=-0.498),靶向VEGF mRNA第386～406位置核苷酸的siRNA和第401～421位置核苷酸的siRNA的"H-b"指数小,抑制蛋白表达的效果好.siRNA正义链的第19个核苷酸碱基为A/U,且第6个核苷酸碱基为A,有较好的沉默靶基因的效果.siRNA的热动力学特征也影响其干扰效果,反义链第9～14位置的内部能量稳定性的均值(AIS)大,易于发挥干扰效果;siRNA反义链的结合能量越低,siRNA反义链与靶序列mRNA结合越稳定,有利于RNA诱导的沉默复合物(RISC)剪切靶序列mRNA.结论成功地设计并合成VEGFsiRNA序列,能有效地抑制VEGF蛋白表达.

关键词：siRNA、血管内皮生长因子、设计、评价

所属期刊栏目：26

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：国务院重点学科建设基金2005

在线出版日期：2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：579-585