人促血液血管生成素的原核表达、分离纯化及活性分析

摘要：

目的利用基因工程技术获得重组的人促血液血管生成素(HAPO),以探讨其对骨髓细胞的作用.方法提取人胎肝总RNA,利用RT-PCR、克隆HAPO cDNA插入表达载体pET32c,使之在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;用DEAESepharose Fast Flow阴离子交换柱、Ni-Chelating Sepharose Fast Flow亲和柱以及SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱分离纯化,肠激酶酶切,液体培养小鼠骨髓细胞.结果经IPTG诱导HAPO实现了在大肠杆菌中的可溶性表达,经一系列层析获得融合的rh-HAPO,肠激酶酶切除去N-端融合部分后,获得高纯度的rh-HAPO.液体培养小鼠骨髓实验发现rh-HAPO可促进CD34+细胞和flk-1细胞的增殖.结论重组蛋白rh-HAPO可促进造血干/祖细胞的增殖.

关键词：人促血液血管生成素、基因表达、分离纯化、大肠杆菌

所属期刊栏目：25

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：中国科学院资助项目30300186;科技部科技攻关项目2002AA2Z3354;Tianjin Natural Sci. Found043607211

在线出版日期：2006-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1114-1118