HRV 14 3C蛋白酶在大肠杆菌的融合表达及活性检测

摘要：

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶.为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶.方法将编码HRV 14 3C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达, 经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C, 再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较.结果每升培养产物可获得纯度≥90%的重组融合蛋白约50 mg,重组GST-3C在4 ℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性.结论 GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化(TAP)系统提供又一种酶切工具.

关键词：人鼻病毒、3C蛋白酶、表达、纯化

所属期刊栏目：25

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2005-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：653-656