人内皮型一氧化氮合酶cDNA在COS-7细胞中的表达

摘要：

本研究从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,扩增出人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA,总长度为3731bp.将其克隆入pUCm-T载体质粒,序列分析表明,克隆所得片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOS cDNA序列同源性达99.93%,在此基础上发现有若干核酸多态性.将该基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,用脂质体转染法将pcDNA3.0/heNOS转染到COS-7细胞株,RT-PCR、Western blot分别检测到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达,分析表明所表达的heNOS蛋白质分子量为145ku;L-14C-精氨酸掺入同位素法检测证实所表达的eNOS蛋白具有生物学活性,能将精氨酸氧化为瓜氨酸.

关键词：内皮型一氧化氮合酶、克隆

所属期刊栏目：23

分类号：Q559;Q785(酶)

资助基金：广东省自然科学基金950372

在线出版日期：2003-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：538-542