AngRem104基因与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-1细胞中的表达定位

摘要：

构建以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因的重组表达质粒AngRem104-pEGFP-N1,利用脂质体转染体外培养的COS-1细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察AngRem104-EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位,用RT-PCR和Western blot方法验证其mRNA和蛋白的表达.结果表明在空载体pEGFP-N1转染组中,COS-1细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒AngRem104-pEGFP-N1转染组中,绿色荧光集中在细胞核中,随着表达量的增高,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状、颗粒状.RT-PCR的结果表明AngRem104在重组质粒转染组中的表达明显高于空载体和空白对照组.Western blot的结果也确证了AngRem104-EGFP融合蛋白的表达.提示新基因AngRem104/pEGFP融合基因真核表达载体在真核细胞COS-1中获得了表达,细胞所表达的融合蛋白具有AngRem104和EGFP的双重活性,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,为基因功能研究提供了线索.

关键词：绿色荧光蛋白、基因表达

所属期刊栏目：23

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39970929;北京大学校科研和教改项目A-21

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：30-34