人FL在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化和生物学活性测定

摘要：

建立人FL(human flt3 ligand, hFL)在大肠杆菌中的高效表达系统,分离纯化重组hFL为其功能和应用研究打下基础.根据大肠杆菌偏爱密码子人工合成hFL基因膜外区DNA片段,由PCR方法获得的hFL基因膜外区DNA片段,经测序证明序列正确.构建表达载体pET30a-Trx-hFL并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,hFL融合蛋白的表达占菌体总蛋白的60%以上,并以包涵体形式存在.融合蛋白经离子交换层析、分子筛层析纯化,并用FXa切割,切割效率＞80%.切割产物经亲和层析纯化.纯化产物进行Western blot鉴定.纯化的rhFL(recombinant hFL)与GM-CSF及TNFα联合作用,具有良好的刺激DC增殖活性,其增殖能力是GM-CSF+TNFα的2.5倍左右.本文以大肠杆菌为宿主,成功地表达了融合蛋白Trx-hFL.经纯化的rhFL在体外与GM-CSF及TNFα联合使用能有效地刺激人DC的增殖.

关键词：FL、融合表达、FXa裂解、纯化、DC

所属期刊栏目：22

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：125-129