幽门螺杆菌全长hpaA基因克隆和在大肠杆菌中高效表达

摘要：

为了构建幽门螺杆菌(H. pylo ri)全长hpaA基因表达质粒,在大肠杆菌中表达重组HpaA(reHpaA)蛋白, 我们用PCR扩增全长hpaA基因,经适当的酶切-连接反应将其连入原核表达质粒pTrc99A, 反应产物转化大肠杆菌JM105, 用Amp(+)培养基筛选, 提取重组菌质粒,PCR和酶切鉴定, 筛选阳性克隆, 并用重组菌质粒进行hpaA基因测序.阳性克隆经IPTG诱导培养, 用SDS-PAGE电泳和Western blo t进行reHpaA表达分析和鉴定, 用薄层扫描分析reHpaA含量.结果显示, 重组质粒pTrc99A- hpaA经PCR和酶切后均产生783bp hpaA基因.重组菌能表达约30kD reHpaA蛋白,含量占全菌体蛋白量的51.99%,Western blot证实其有免疫反应性.重组H. pylori HpaA表达质粒的成功构建及在大肠杆菌中高效表达的实现, 为探索制备H. pylori疫苗奠定了一定基础.

关键词：幽门螺杆菌、hpaA基因、大肠杆菌、疫苗、重组

所属期刊栏目：21

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：卫生部临床学科重点项目97040226;广东省科技厅科技计划99No4802G;广东省自然科学基金990077;广东省教育厅千百十工程优秀人才培养基金2000-08

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：527-530