1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法

摘要：

基于Golden Gate载体构建过程,对CRISPR/Cas9双靶点敲除技术的载体构建系统进行了优化,建立了一种简单快速高效且无PCR扩增的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法.在本方法中,只需将设计好的2个靶点DNA小片段和1个外源片段用T4 DNA连接酶构建到CRISPR/Cas9载体上即可.用本方法对10个已报道的水稻基因构建了20个双靶点CRISPR/Cas9载体,阳性率为100％,测序结果显示无突变.该载体系统非常适合大批量CRISPR/Cas9载体的构建,同时也为其他植物中构建双靶点CRISPR/Cas9载体提供借鉴.

关键词：水稻、CRISPR/Cas9、基因敲除、基因编辑、双靶点、载体构建

所属期刊栏目：39

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重大科技专项2016ZX08001-001

在线出版日期：2020-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：9-18