团头鲂白细胞介素6基因启动子报告载体的构建及活性分析

摘要：

为了解鱼类白细胞介素6(IL-6)基因的转录调控原理及其免疫作用机制,构建5个团头鲂 il-6基因启动子的荧光素酶报告质粒(PGL3-IL-6P),以 PGL3-basic 质粒作为阴性对照,将它们分别与内参质粒 pRL-TK共转染进鲤 EPC 细胞,并用100 ng/mL 的 LPS 诱导转染过重组载体的细胞,24 h 后检测荧光素酶的活性。结果显示：与阴性对照组相比,质粒转染组 PGL3-IL-6P-0、PGL3-IL-6P-1、PGL3-IL-6P-2、PGL3-IL-6P-3与 PGL3-IL-6P-4的荧光素酶活性均明显升高,其中 PGL3-IL-6P-4组的荧光素酶活性最高,表明该启动子缺失体(－379至＋34)包含 il-6的核心启动子。用 LPS 刺激转染过重组载体的细胞后发现,与未经 LPS 刺激的对照组相比,仅 PGL3-IL-6P-4组的活性明显增强,而其余缺失体的活性则没有显著变化,这进一步表明 PGL3-IL-6P-4缺失体包含核心启动子区,并推测该核心启动子区域存在的潜在转录因子 NF-κB 与 C/EBPβ等可能是响应 LPS 刺激的重要作用元件。

关键词：团头鲂、白细胞介素 6、荧光素酶报告质粒、启动子活性、LPS

分类号：Q959.46+8;S917(动物学)

资助基金：国家自然科学基金项目31572613;国家科技支撑计划2012BAD26B00;中央高校基本科研业务费专项2014PY042和2662015PY134

在线出版日期：2016-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：86-91