欧洲鳗鲡免疫球蛋白轻链基因的克隆及表达分析
通过RT-PCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)Ig轻链基因cDNA全长序列,命名为AaIgL,其全长为1 016 bp,开放阅读框为714 bp,编码238个氨基酸.将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明新增的27ku蛋白条带与预期值相符,且与兔抗欧洲鳗鲡IgM血清发生特异性显色反应,证实了AaIgL基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;实时荧光定量PCR检测结果发现:AaIgL在欧洲鳗鲡各组织中均有表达,其中脾脏的表达量最高,肾脏和心脏中也有较高的表达水平,而肝脏、肌肉、鳃以及肠中的表达量较低;欧洲鳗鲡经山羊IgG肌肉注射后脾脏和肾脏的AaIgL表达水平明显上升,其峰值分别为第7天和第14天,AaIgL在脾脏的表达量显著高于肾脏,但是第21天后均恢复至正常水平.以上结果表明,AaIgL在欧洲鳗鲡机体免疫防御中发挥重要作用,脾脏是AaIgL基因的主要表达器官.
欧洲鳗鲡、免疫球蛋白轻链、原核表达、荧光定量PCR
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S965.223(水产养殖技术)
国家自然科学基金项目31272685;福建省教育厅项目JA11150;福建省海洋与渔业厅项目201212140006;集美大学科研基金项目C60819
2015-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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