鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化

摘要：

为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和ompporinΠ基因,设计特异性引物后分别扩增基因中表达外膜蛋白膜外区域且抗原决定簇丰富的3个基因片段并通过融合PCR技术进行连接.根据表达载体(pGEX-2T-his)的限制性酶切位点,在连接片段的两端引入BamH工和EcoR Ⅰ两个酶切位点,将3个外膜蛋白基因片段与质粒连接后成功构建了重组表达载体.重组表达载体成功转化大肠杆菌(E.coli BL21)后,当菌液浓度(D600nm)为0.8时加入0.25 mmol/L IPTG,16℃培养过夜后得到了高效表达.表达产物用镍柱进行洗脱纯化后经梯度尿素复性获得了分子质量约85 ku的高纯度蛋白.

关键词：迟缓爱德华氏菌、创伤弧菌、嗜水气单胞菌、三联外膜蛋白、表达与纯化

所属期刊栏目：34

分类号：S942.5(水产保护学)

资助基金：国家自然科学基金项目31001136;鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心开放课题RE201506

在线出版日期：2015-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：104-110