罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的克隆及原核表达质粒构建

摘要：

为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框( ORF)。结果表明,该基因包括3405 bp的ORF,可编码1134个氨基酸,与已报道的人源无乳链球菌ScpB的氨基酸同源性达99.74%。利用生物信息学软件DNAstar、Clustal X 2.0和MEGA 5.05及在线分析工具ExPASy ProtParam、NCBI Proten blast及Conserved Domain等对推导的氨基酸序列进行分析,结果显示罗非鱼无乳链球菌scpB基因编码的氨基酸序列含有3个催化三联体( catalytic triad)位点、7个假定活性位点( putative active site)、2个特异位点( spe-cific hits),以及4个超家族结构(2个肽酶超家族结构Peptidases-S8-S53 superfamily、1个类纤连蛋白超家族结构DUF1034 superfamily和1个鞭毛钩蛋白超家族结构FlgD-lg superfamily)；并且该氨基酸序列有多个抗原表位,推测ScpB蛋白应具有较强的免疫原性,可作为候选的蛋白疫苗成分。将该片段插入原核表达载体pET32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆,经PCR、酶切及测序鉴定表明成功构建原核表达载体pET32a(+)/scpB。

关键词：罗非鱼、无乳链球菌、C5 a肽酶、克隆、原核表达质粒

分类号：Q959.483(动物学)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项CARS-49;广东省海洋渔业科技推广专项A201101C02

在线出版日期：2014-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：92-99