利用DNA shuffling技术构建含5个cry基因的突变体库以筛选高毒力杀虫蛋白

摘要：

以改造合成的5个Bt基因(crylC*、cry2A*、crylAb、crylAc和fry9C*)为材料,利用DNA shuff-ling的体外分子进化技术构建1个含有1 000个重组基因克隆的大肠杆菌表达库;通过诱导表达重组蛋白.ELISA方法测定蛋白表达量,以棉铃虫(Helicoverpa armigera)为试验昆虫进行毒性试验.结果显示:重组克隆的蛋白毒性与阳性对照crylAc相比,增强的有122个,持平的有38个,有毒性但毒性降低的有232个,失去毒性的有608个;对这1 000个重组克隆进行了测序.比较了重组基因与原始基因的序列同源性,除去55个克隆未能找到其原始基因来源,将其余的945个重组克隆从5个Cry蛋白的核苷酸编码序列的同源性出发,划分为源于crylC*、cry2A*、crylAb、crylAc和fry9C*的5个重组克隆类型.根据毒力变化分为毒力上升、持平、下降3组.对1 000个重组基因的氨基酸序列进行分析后发现,相对于毒力上升和持平组,5个毒力下降组的重组克隆间的氨基酸序列同源性最低.

关键词：DNA shuffling、Cry蛋白、序列比较、突变体库

所属期刊栏目：30

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重大科技专项"抗虫转基因新品种培育"2008ZX08001-001

在线出版日期：2011-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：13-17