牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用

摘要：

建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列,利用Primer Explorer V3软件设计了6条引物,并对LAMP反应温度和反应时间等条件进行了优化.该方法的检测限为30 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与鲤春血症病毒、传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、海洋双 RNA 病毒、病毒性出血败血症病毒以及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应.该方法检测时间短,在1 h内即可完成检测.用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明40尾石鲽鱼样品中有3尾感染HRV,与病毒分离结果一致,说明LAMP方法比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断.

关键词：牙鲆弹状病毒、环介导等温扩增、聚合酶链式反应、检测

所属期刊栏目：29

分类号：Q937.47(微生物学)

资助基金：国家质量监督检验检疫总局科研项目2009IK002,2007IK267

在线出版日期：2010-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：203-207