毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析

摘要：

从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段.测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG).将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3).IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70 ku.酶活性分析表明:该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性,其偏爱性顺序为PA＞FA＞CA,对SA则没有活性.

关键词：毛白杨、4-香豆酰辅酶A连接酶、原核表达、偏爱性

所属期刊栏目：25

分类号：S792.117.035.3(森林树种)

资助基金：中国科学院资助项目30571177;国家科技攻关项目2001AA241101,2004AA241100

在线出版日期：2006-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：101-105