10.3969/j.issn.0253-4193.2014.08.011
一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析
从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶(Sp)基因(GenBank 登录号:KC161207),对该基因的开放阅读框(ORF)进行系统的生物信息学分析,并在大肠杆菌中融合表达,通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明:EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp,编码368个氨基酸,蛋白相对分子质量为39.5 kDa;该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高,核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95%和97%,而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28%~32%,说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员;预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC (组氨酸活性位点区域)和 AICNGDSGGPLF(丝氨酸活性位点区域)两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序,是一个两次跨膜蛋白;将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达,得到分子量为60 kDa 的重组蛋白,经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶(MB-SP)抗体检测证实为 Sp,且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。
海洋球石藻病毒、丝氨酸蛋白酶、基因克隆、重组表达、活性分析
Q939.4(微生物学)
国家海洋公益性行业专项201305027。
2014-08-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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