中国对虾6种组织cDNA文库的构建

摘要：

以中国对虾血液、眼柄、卵巢、雌虾头胸部、雄虾头胸部和三倍体对虾头胸部组织为材料,采用异硫氰酸胍-酸酚法提取总RNA;用磁珠法纯化mRNA;用Uni ZAP cDNA合成试剂盒合成双链cDNA并进行修饰,将cDNA定向连接在Uni ZAP载体上;经Gigapack GoldPackage包装试剂盒包装成为噬菌体颗粒,转染宿主XL1 Blue MRF'菌株细胞,形成初级文库.初级文库经转染进一步扩增,形成稳定的cDNA文库.6个文库的库容在0.2×106～1.3×106之间,重组率都超过90%.从各文库随机取出6～10个清晰的噬菌斑进行PCR扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段长度为500～2 500 bp.由初步功能基因克隆获得阳性结果.多项指标表明,所构建的对虾cDNA文库质量较高,为进一步筛选目的基因、EST测序和制作基因芯片提供了有效的工具.

关键词：中国对虾、cDNA文库、功能基因

所属期刊栏目：27

分类号：Q343.1(遗传学分支学科)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA628030,2003AA603440;国家自然科学基金30230280

在线出版日期：2005-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：92-95