许氏平鲉蛋白激酶B(SsAkt)基因的克隆及其mRNA在细菌胁迫后的表达规律

摘要：

为研究蛋白激酶B(Akt)在许氏平鲉(Sebastes schlegelii)应答细菌胁迫过程中的作用,本研究应用PCR技术对许氏平鲉Akt基因(SsAkt)的编码区序列进行了克隆和特征分析,并应用实时荧光定量PCR技术检测了健康许氏平鲉各组织和细菌胁迫后肾脏、血液和肝脏中SsAkt mRNA的表达规律.结果显示,SsAkt的开放阅读框(ORF)的长度为1440bp,编码479个氨基酸,预测其蛋白的相对分子质量为55.80 kDa,理论等电点(pI)为5.64.SMART分析显示,SsAkt蛋白含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的3个特征性保守结构域和2个磷酸化位点.同源比对发现,SsAkt与鱼类的同源性较高,与尖嘴鲈(Lates calcarifer)的相似度最高,为99.37％.组织表达分析显示,SsAkt在许氏平鲉健康组织(血液、鳃、肝脏、肌肉、肾脏、脾脏、肠、脑和心脏)中均有表达,在肾脏、脑和血液中的相对表达量较高.许氏平鲉响应细菌胁迫的表达结果显示,藤黄微球菌(Micrococcus luteus)感染后,SsAkt在3种组织中的表达明显上调,呈先上升后下降的趋势;鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后,SsAkt在3种组织中呈现不同的表达趋势:在肾脏中,SsAkt的表达趋势为先上升后下降又上升再下降,而在血液和肝脏中的表达趋势为先上升后下降.以上研究表明,SsAkt响应了外源微生物对许氏平鲉的胁迫,在抵御外源微生物免疫应答过程中发挥重要作用.本研究结果为许氏平鲉的免疫机理研究奠定了基础.

关键词：许氏平鲉、蛋白激酶B、Akt、基因克隆、表达规律

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分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：现代农业产业技术体系;山东省重点研发计划项目;山东省自然科学基金;烟台市科技创新发展计划项目;烟台市科技创新发展计划项目

在线出版日期：2024-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：47-59