黄姑鱼转录因子激活蛋白AP2α的克隆和特征分析

摘要：

转录因子激活蛋白AP2α是一类能特异地结合DNA的核转录因子,参与动物胚胎发育的调节、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生以及免疫反应等多种生物过程.课题组前期通过基因组关联分析(GWAS)发现,AP2a是黄姑鱼(Nibea albiflora)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的候选基因.本研究克隆了黄姑鱼转录因子AP2α,其开放阅读框(ORF)为1 275 bp,编码424个氨基酸;所编码的AP2α蛋白质N端是富含脯氨酸和谷氨酰胺(P/Q-rich domain)的反式激活结构域,中间是中心基本结构(central basic region),C端为高度保守的helix-span-helix基序,负责结合DNA和蛋白质二聚化.氨基酸序列多重比对表明,AP2α保守性强,与所检测的鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物同源性在84.63％以上.实时荧光定量PCR检测结果显示,AP2α基因的mRNA广泛分布于所检测的黄姑鱼9种组织样品中,其中血液中的表达量最高;受哈维氏弧菌攻毒感染后,肝脏、脾脏和头肾中4 P2α表达量均明显升高,特别是在肝脏中,AP2αmRNA表达水平在24 h时达到攻毒前的39倍.通过构建重组真核表达质粒pGEFP-AP2α并转染HEK293T细胞进行亚细胞定位研究的结果显示,AP2α分布于HEK293T细胞的细胞核中.进一步通过原核克隆表达获得了可溶性的GST-AP2α融合蛋白.以上结果表明,AP2α在黄姑鱼抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用.本研究对AP2α在硬骨鱼类先天免疫中的重要功能提供了新的见解,为深入研究黄姑鱼的分子免疫机理和抗病分子育种奠定了基础.

关键词：黄姑鱼、转录因子激活蛋白AP2α、哈维氏弧菌、实时荧光定量PCR、亚细胞定位、蛋白表达

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分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：国家重点研发计划;福建省自然科学基金项目;福建省新世纪人才支持计划;福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室开放基金

在线出版日期：2023-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：104-114