中华蛸vasa基因的克隆及表达分析

摘要：

vasa基因编码的蛋白是DEAD-box(Asp-Glu-Ala-Asp)蛋白家族成员,对真核生物生殖细胞的形成具有关键作用.本研究使用cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了中华蛸(Octopus sinensis)vasa基因全长,共2438bp,其中,开放阅读框长2067bp,编码688个氨基酸,5'-UTR长128bp,3'-UTR 长 244 bp(包含 A 尾巴).基于 ExPASy、Signal 4.1、TMHMM、SMART 等在线软件对 Os-vasa基因的蛋白质结构进行预测,得出其氨基酸分子量为76 580.53 Da,理论等电点为5.89.无信号肽,跨膜区域没有明显的信号,因此,推测其为胞内蛋白,不属于膜蛋白.该蛋白具有DEXDc和HELICc 2个功能结构域,而且有9个DEAD-box家族蛋白的典型保守区域,表明所得cDNA属于vasa基因家族.使用qRT-PCR对中华蛸各时期胚胎、初孵幼体及2个发育时期的卵巢及雌雄不同组织的表达模式进行分析.结果显示,Os-vasa基因在性腺中特异性表达,且在卵巢中的表达大于精巢,未成熟和成熟卵巢中均有vasa mRNA表达,且未成熟期表达量较高.因此,推测Os-vasa基因可能在卵巢发育过程和功能维持等方面起到重要作用.在中华蛸早期胚胎发育阶段,均能检测到Os-vasa基因转录本,前10 d微弱表达,从第13天开始,表达量逐渐上升,至第19天达到最高.在初孵幼体阶段,Os-vasa分别在第8天和第20天出现最低和最高表达量.本研究结果可为中华蛸原始生殖细胞起源、迁移和分化提供理论资料,有助于加深对中华蛸卵巢发育和卵子发生过程的理解.

关键词：中华蛸、vasa、基因克隆、表达分析

所属期刊栏目：43

分类号：S965(水产养殖技术)

资助基金：现代农业产业技术体系2020GH02

在线出版日期：2022-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：118-128