十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

摘要：

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1,DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并以pMD 18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估.结果 显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25 μl反应体系中包含2.5 μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 UBst 2.0 WarmStart(R) DNA聚合酶、0.8 μmol/LEvaGreen(R)和4.4μlddH2O.该方法检测灵敏度下限为3.54× 102拷贝/反应;与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VPAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应;具有较好的重复性和稳定性.以GeneFinder(R)替换EvaGreen(R)并将其预置于反应管内,结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测.本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点,为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择,有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控.

关键词：十足目虹彩病毒(DIV1)、虾血细胞虹彩病毒(SHIV)、环介导等温扩增(LAMP)、检测方法

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分类号：S945.4(水产保护学)

资助基金：国家重点研发计划项目;中国水产科学研究院基本科研业务费;中国水产科学研究院黄海水产研究所级基本科研业务费项目

在线出版日期：2020-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：156-164