尼罗罗非鱼精巢支持细胞分离培养体系建立及优化

摘要：

本研究分离培养尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)精巢支持细胞(Sertoli cells,SCs),建立并优化尼罗罗非鱼精巢支持细胞分离培养体系.无菌条件下,取发育至第Ⅲ期的尼罗罗非鱼精巢,PBS清洗后,剪碎精巢组织,0.25％胰蛋白酶消化,用含10％犊牛血清(Newborn bovine serum,NBS)的L-15培养液终止消化,过滤、离心,获得细胞.差速贴壁法获得SCs后,在26℃、无CO2饱和湿度恒温培养箱中培养.分别采用含10％ NBS的L-15、M199、F12培养液,含5％、10％、15％ NBS的L-15培养液,含1％罗非鱼血清的L-15+10％ NBS培养液培养尼罗罗非鱼SCs.各组每2d取细胞计数,绘制SCs生长曲线;甲基绿染色,倒置显微镜下观察SCs的形态.尼罗罗非鱼SCs培养1～2 d,细胞贴壁;培养3～5 d,细胞完全贴壁并迅速增殖.单个SCs呈不规则多边形,其核位于胞质中央,呈卵圆形,胞质中可见吞噬颗粒和空泡,空泡聚集于支持细胞胞质的两极或散布于核的四周.SCs在L-15培养液中贴壁生长,在F12、M199培养基中较难贴壁.与F12、M199培养液相比,L-15培养液更有助于尼罗罗非鱼SCs生长增殖(P＜0.01).与添加5％和15％ NBS相比,在L-15培养基中添加10％NBS更有助于尼罗罗非鱼SCs生长增殖(P＜0.05).与未添加尼罗罗非鱼血清相比,在10％ NBS+L-15培养中添加1％尼罗罗非鱼血清,能显著促进SCs生长增殖(P＜0.05).研究表明,采用胰酶消化差速贴壁法获得尼罗罗非鱼精巢支持细胞,10％ NBS+1％罗非鱼血清+L-15培养液培养,能显著促进尼罗罗非鱼精巢支持细胞生长增殖.

关键词：尼罗罗非鱼、支持细胞、分离培养、体系优化

所属期刊栏目：41

分类号：S917.4(水产基础科学)

资助基金：广东海洋大学博士启动基金;广东海洋大学大学生创新实验项目

在线出版日期：2020-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：119-126