病原性鳗弧菌(Vibrio anguillarum)双重PCR与LAMP检测方法的建立

摘要：

本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌(Vibrio anguillarum)毒力相关基因的携带情况,并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法.以PCR方法检测8个毒力相关基因的分布,结果显示,22株病原鳗弧菌均可扩增出6个基因(empA、vah1、vah4、flaA、rtxA和tonB)目的条带,未扩增出virA和angM基因;针对vah4和rtxA设计引物进行双重PCR扩增,同一PCR反应体系可扩增出两条目的条带,灵敏度为2.4×103 CFU/ml,对照菌无任何扩增条带;以yah4设计引物进行LAMP扩增,病原鳗弧菌可扩增出阶梯状条带,呈现阳性反应,6株对照菌无阶梯状扩增条带且呈现阴性反应,LAMP扩增灵敏度为2.4×101 CFU/ml.LAMP检测灵敏度是双重PCR的100倍,LAMP技术与PCR比较,操作简便、快速、灵敏度高且不需昂贵仪器,LAMP检测鳗弧菌的方法更适合于养殖生产实际应用.

关键词：鳗弧菌、毒力相关基因、双重PCR、环介导恒温扩增技术(LAMP)

所属期刊栏目：36

分类号：Q522(核酸)

资助基金：江苏省高校自然科学研究重大项目14KJA240001;江苏省水产三项工程项目Y2014-35,D2013-5-4;江苏高校优势学科建设工程项目2014;教育部留学回国人员科研启动基金共同资助

在线出版日期：2016-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：49-55