对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立

摘要：

根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列，设计特异性的锁式探针及其扩增引物，优化反应条件，建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接，探针在Taq DNA连接酶作用下，58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明，该体系能够特异性地检测出 HPV，而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应；灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl，与PCR检测方法相比，一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少，基本都在等温条件下进行，不需要PCR仪，可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。

关键词：对虾、肝胰腺细小病毒、检测、滚环扩增

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：公益性行业农业科研专项经费201103034;现代农业产业技术体系CARS-47;中国水产科学研究院基本科研业务费2012A05共同资助。

在线出版日期：2014-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：59-65