养殖沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

利用GyrB基因的特异性引物建立沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR检测方法.将已知浓度的气单胞菌菌液加入灭菌的沉积物样品中,作为模拟沉积物样品.通过选择和优化沉积物DNA提取方法、特异性引物、标准曲线模板,建立沉积环境中气单胞菌属细菌准确检验的实时荧光定量PCR方法,同时验证该方法的特异性、灵敏性、重复性.结果表明,采用改进的溶菌酶-SDS温和裂解法提取沉积物DNA,以扩增GyrB基因片段的IAF和IAR为特异性引物,并直接以模拟沉积物样品DNA为标准品构建标准曲线,可以建立适用于定量检测沉积环境中气单胞菌属细菌的实时荧光定量PCR方法.该方法可灵敏、特异、准确地定量检测刺参养殖池塘底泥中气单胞菌属中不同种的细菌,检出效率可达103 CFU/g.统计分析显示,变异系数为0.21％-0.80％,均小于5％,表明重复性良好.

关键词：GyrB基因、沉积环境、气单胞菌属、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：35

分类号：Q939.96(微生物学)

资助基金：国家自然基金项目31170113

在线出版日期：2014-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：126-133