棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达

摘要：

以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus uscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列.Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60％～95％之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly.NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaara piscidin-like peptide (ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioides Piscidin-like peptide(ACE78291)以高达81％的支持率聚为一支.也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列.推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈a螺旋构型.将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis(EF),并在大肠杆菌 E.coli Origami(DE3)中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在.

关键词：抗菌肽、Piscidin、基因克隆、原核表达、棕点石斑鱼

所属期刊栏目：32

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划项目2006AA100308;广东省大学生创新实验项目1059010021

在线出版日期：2012-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：126-133