哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究

摘要：

胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱氨酸蛋白酶,分子量约55 kD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase.本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ为由本实验室构建的能够分泌目的蛋白酶的重组菌),并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h,粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%.GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析,Sephadex G-25凝胶过柱后,得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase.选择白油、蜂胶和弗氏3种不同佐剂与适量抗原混匀,分别免疫3只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照.3次免疫后制备小鼠血清,间接ELISA测定抗体效价,除空白对照外,其他8组小鼠的免疫血清效价达1∶1.6×104～1∶2.56×105,免疫组的效价从高到低依次为弗氏＞白油＞蜂胶＞不加佐剂,不同佐剂的免疫效果依次为:弗氏＞白油＞蜂胶.免疫印迹实验结果表明,小鼠血清在55 kD处有明显的反应条带.

关键词：哈维氏弧菌、胞外蛋白酶、佐剂、间接ELISA、免疫印迹

所属期刊栏目：31

分类号：S917.1(水产基础科学)

在线出版日期：2010-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：107-112