黄鳍棘鲷重组IL-1β的表达及生物学活性检测

摘要：

将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β(Interleukin 1β, IL-1β)基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达.采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性.经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β (Recombinant Interleukin 1β, rIL-1β).采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1.080 g/ml的界面上可以有效富集白细胞.用不同终浓度的rIL-1β和5μg/ml脂多糖(LPS)刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20 ng/ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5 μg/ml LPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性.

关键词：黄鳍棘鲷、rIL-1β、Percoll不连续密度梯度离心、细胞培养、RT-PCR

所属期刊栏目：30

分类号：Q344(遗传学分支学科)

资助基金：国家科技基础条件平台项目2005DKA30470;广东省科技计划项目2006B60101038

在线出版日期：2009-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：97-102