中国明对虾鳃细胞全长cDNA文库的构建

摘要：

利用SMART (Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技术,以同源重组的方式构建了中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库.首先用RNA提取试剂盒从中国明对虾鳃细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,CDSⅢOligo(dT)为引物,反应一段时间后,再加入转换模板(Switching template),反转录合成cDNA第1链.在DNA聚合酶的作用下,通过长距离PCR,扩增双链DNA.双链cDNA经凝胶过滤柱纯化后,与线性化的pGADT7-Rec质粒载体同源重组,转化感受态AH109酵母菌株后,得到中国明对虾鳃细胞的全长cDNA文库.经测定该文库的容量为2.1×106,扩增后文库的滴度为7.3×107 cfu/ml.经菌落PCR测定,该文库的重组率为90%.

关键词：中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)、鳃细胞、全长cDNA文库

所属期刊栏目：25

分类号：Q81;S945.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999012002;国家自然科学基金30271020;山东省青岛市自然科学基金03-2-JZP-10;山东省自然科学基金Q2002D02;中国水产科学院科研项目2003-青-6

在线出版日期：2004-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11